動(dòng)物源性食品中喹諾酮類藥物殘留LC-MS/MS分析方法
背景
喹諾酮類（Quinolones, QNs）是人工合成的一類抗菌藥物，因其具有抗菌譜廣、高效、低毒、組織穿透力強(qiáng)、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，已成為食品動(dòng)物飼養(yǎng)和水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一，但由于細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物耐藥性的產(chǎn)生和某些喹諾酮類藥物的潛在致癌作用，其殘留問題已引起廣泛關(guān)注。
2003 年我國(guó)的鰻魚產(chǎn)品就曾因氟喹諾酮類藥物殘留問題出口日本受阻。目前，包括我國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家和地區(qū)都對(duì)喹諾酮類藥物的使用范圍和最大殘留限量做出規(guī)定。歐盟規(guī)定動(dòng)物肌肉等組織中恩諾沙星等的MRLs 為0.01 ～ 1.9 mg/kg；美國(guó)禁止在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用QNs；日本對(duì)進(jìn)口生鰻魚及其制品的環(huán)丙沙星等殘留限量控制在檢測(cè)限的0.05 mg/kg。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第2292 號(hào)，自2016 年12 月31 日起，停止經(jīng)營(yíng)、使用用于食品動(dòng)物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4 種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。本文根據(jù)《GB/T20366-2006 動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測(cè)定液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法》，采用PerkinElmer QSight LCMSMS 建立動(dòng)物源食品中喹諾酮類藥物殘留的解決方案。
樣品前處理方法
提取
稱取5.0 g 試樣，置于50 mL 聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL 甲酸- 乙腈溶液（1:49），均質(zhì)1 min，以4000 r/min 離心5 min。上清液移入另一個(gè)50 mL聚四氟乙烯離心管中。將離心殘?jiān)?0mL 甲酸- 乙腈溶液再提取一次，合并上清液。
凈化
將上清液轉(zhuǎn)移至125 mL 分液漏斗中，加入25 mL乙腈飽和的正己烷，振搖2 min，將下層溶液轉(zhuǎn)移至100 mL 棕色雞心瓶中，于40 ℃水浴中旋蒸至近干，氮吹至干。準(zhǔn)確加入1.0 mL 甲酸- 乙腈溶液溶解殘?jiān)?，渦流混勻后，過濾至樣品瓶中，供LC-MS/MS 測(cè)定。
LC-MS/MS 方法
液相色譜參數(shù)
色譜柱：Brownlee SPP C18，100 mm*2.1 mm，2.7μm （貨號(hào)：N9308404）
柱溫：35 ℃
流動(dòng)相：A：乙腈，B：水（含0.1 % 甲酸，2.0 mM 乙酸銨）
流速：0.4 mL/min
運(yùn)行時(shí)間：10 min
梯度洗脫：洗脫程序見表1：
質(zhì)譜參數(shù)
以下參數(shù)以PerkinElmerQSight 200 系列為例，喹諾酮類化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2。
離子源質(zhì)譜參數(shù)：
離子源模式：電噴霧離子源，正離子模式（ESI+）
反吹氣：75
霧化氣：220
離子源溫度：450 ℃
離子源噴霧電壓：5000 V
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
各組分的色譜圖如圖1 所示，各個(gè)化合物均獲得良好的色譜分離
十六種喹諾酮類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性見表3，氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的濃度梯度為：0.001，0.002，0.005，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10 ng/mL。圖2 為氟甲喹的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
其余喹諾酮目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.01-50 ng/mL，依次為0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0 ng/mL。其中，諾氟沙星和環(huán)丙沙星為0.05-50 ng/mL，萘啶酸和氟甲喹為0.001-10 ng/mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)具有良好的線性（R2> 0.994）；采用魚肉基質(zhì)作為加標(biāo)樣品，平行6 個(gè)樣品測(cè)試方法的回收率和方法重現(xiàn)性，詳細(xì)結(jié)果請(qǐng)見表4。從表4 可以看到，在加標(biāo)濃度為2 ng/mL 下，回收率為92.25-105.87 %，方法重現(xiàn)性為1.53-4.78%。最低定量限為0.0002-0.01μg/kg，完全符合殘留檢測(cè)要求。
結(jié)論
本方法完全滿足對(duì)GB/T 20366-2006 動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的檢測(cè)要求（標(biāo)準(zhǔn)里的最低限量為1.0μg/kg），適用于喹諾酮及其類似物的日常檢測(cè)。PerkinElmerQSight 210TM 系統(tǒng)完全滿足動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的日常檢測(cè)工作。該質(zhì)譜系統(tǒng)離子源具有自清潔功能以及質(zhì)譜接口HSID 熱源去溶劑技術(shù)，提高儀器抗污染能力，從而獲得更低的噪音，更低的檢測(cè)限，從容應(yīng)對(duì)復(fù)雜基質(zhì)的食品安全檢測(cè)。
參考文獻(xiàn)
1. GB/T 20366-2006 動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測(cè)定 液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法
色譜柱及標(biāo)準(zhǔn)品訂購信息
PerkinElmer SPP 系列色譜柱訂購信息：色譜柱采購直線：
021-60645658，021-60645659
電子郵件：consumable.china@perkinelmer.com。
標(biāo)準(zhǔn)品訂購信息：
1ST9243-100M | 16 種喹諾酮類混標(biāo)溶液，100ppm |
組分 | |
產(chǎn)品號(hào) | 中文 | 英文 | CAS# | MF |
1ST4100 | 達(dá)氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 | C19H20FN3O3 |
1ST4107 | 恩諾沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 | C19H22FN3O3 |
1ST5703 | 環(huán)丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 | C17H18FN3O3 |
1ST5714 | 依諾沙星 | Enoxacin | 74011-58-8 | C15H17FN4O3 |
1ST5719 | 氟羅沙星 | Fleroxacin | 79660-72-3 | C17H18F3N3O3 |
1ST5735 | 萘啶酸 | Nalidixic acid | 389-08-2 | C12H12N2O3 |
1ST5738 | 諾氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 | C16H18FN3O3 |
1ST5740 | 氧氟沙星 | Ofloxacin | 82419-36-1 | C18H20FN3O4 |
1ST5743 | 奧比沙星 | Orbifloxacin | 113617-63-3 | C19H20F3N3O3 |
1ST5745 | 惡喹酸 | Oxolinic acid | 14698-29-4 | C13H11NO5 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 | C19H22F2N4O3 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 | C17H20FN3O3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 | C20H17F2N3O3 |
1ST5758 | 雙氟沙星 | Difloxacin | 98106-17-3 | C21H19F2N3O3 |
1ST5761 | 氟甲喹 | Flumequine | 42835-25-6 | C14H12FNO3 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 | C17H19F2N3O3 |
